国家开放大学 / 农产品检验技术
将新鲜猪肉切成小块后，用匀浆机打成匀浆，储存于塑料袋中，保存备用。
提取：将50mL离心管放入小烧杯中，放在电子秤上归零，准确称取匀浆后的样品2g于50mL离心管中，用移液枪吸取2mol/L乙酸钠溶液8mL于50mL离心管中，在涡旋混合器上充分混匀，再用移液枪吸取葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶50uL于50mL离心管中，在涡旋混合器上充分混匀，于37℃恒温水浴振荡器中水解12h。
结束后将离心管取出，用移液枪吸取100uL甲酚内标工作液于50mL离心管中，加盖后置于水平振荡器上震荡15min，结束后取下离心管，放入离心机，配平后离心10min，取出离心管，将全部上清液转移至另一个50mL离心管中，通过PH计用盐酸溶液将上清液调至PH为1，清洗后，再通过PH计用氢氧化钠溶液将上清液调至PH为11，结束后用移液枪吸取氯化钠溶液和异丙醇-乙酸乙酯溶液各10mL于50mL离心管中，离心10min，转移全部有机相于玻璃试管中，在40℃水浴下用氮气将其吹干，用移液枪吸取5mL 0.2mol/L乙酸钠溶液加入玻璃试管中，之后将玻璃试管放入塑料烧杯中，超声混匀，待残渣充分溶解后备用。
净化：将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置，先用5mL甲醇溶液预洗真空柱，再用5mL蒸馏水预洗真空柱，然后将样品过柱，之后用5mL蒸馏水清洗真空柱，再用5mL甲酸溶液清洗真空柱，之后用5mL甲醇溶液清洗真空柱，结束后在真空过柱装置中放入收集管，用2mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分，流速控制在0.5 mL/min。洗脱液在40℃水浴下用氮气吹干。用移液枪吸取200uL 0.1% 甲酸/水-甲醇溶液(95+5)于收集管中，之后将玻璃试管放入塑料烧杯中，超声混匀，将溶液转移到1.5 mL离心管中，15000r/min离心10min，上清液供液相色谱质谱联用仪测定。
液相色谱质谱联用仪测定条件：色谱柱C18柱，150mm×2.1mm（内径），粒度5um；
流动相：A：0.1%甲酸/水，B：0.1%甲酸/乙腈；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL；离子源：电喷雾（ESI），正离子模式；扫描方式：多反应监测（MRM）；脱溶剂气、锥孔气、碰撞器均为高纯氮气或其他合适的高纯气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最优灵敏度。
液相色谱质谱联用仪测定：按照液相色谱质谱联用仪测定样品和混合标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。在上述色谱条件下克仑特罗的参考保留时间为15.66min。空白试验除了不加试样外，均按上述测定步骤进行。这种测定方法属于（ ）。
猪肉中克仑特罗含量的测定
猪肉中有机磷农药含量的测定
猪肉中四环素类药物残留含量的测定
提取：将50mL离心管放入小烧杯中，放在电子秤上归零，准确称取匀浆后的样品2g于50mL离心管中，用移液枪吸取2mol/L乙酸钠溶液8mL于50mL离心管中，在涡旋混合器上充分混匀，再用移液枪吸取葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶50uL于50mL离心管中，在涡旋混合器上充分混匀，于37℃恒温水浴振荡器中水解12h。
结束后将离心管取出，用移液枪吸取100uL甲酚内标工作液于50mL离心管中，加盖后置于水平振荡器上震荡15min，结束后取下离心管，放入离心机，配平后离心10min，取出离心管，将全部上清液转移至另一个50mL离心管中，通过PH计用盐酸溶液将上清液调至PH为1，清洗后，再通过PH计用氢氧化钠溶液将上清液调至PH为11，结束后用移液枪吸取氯化钠溶液和异丙醇-乙酸乙酯溶液各10mL于50mL离心管中，离心10min，转移全部有机相于玻璃试管中，在40℃水浴下用氮气将其吹干，用移液枪吸取5mL 0.2mol/L乙酸钠溶液加入玻璃试管中，之后将玻璃试管放入塑料烧杯中，超声混匀，待残渣充分溶解后备用。
净化：将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置，先用5mL甲醇溶液预洗真空柱，再用5mL蒸馏水预洗真空柱，然后将样品过柱，之后用5mL蒸馏水清洗真空柱，再用5mL甲酸溶液清洗真空柱，之后用5mL甲醇溶液清洗真空柱，结束后在真空过柱装置中放入收集管，用2mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分，流速控制在0.5 mL/min。洗脱液在40℃水浴下用氮气吹干。用移液枪吸取200uL 0.1% 甲酸/水-甲醇溶液(95+5)于收集管中，之后将玻璃试管放入塑料烧杯中，超声混匀，将溶液转移到1.5 mL离心管中，15000r/min离心10min，上清液供液相色谱质谱联用仪测定。
液相色谱质谱联用仪测定条件：色谱柱C18柱，150mm×2.1mm（内径），粒度5um；
流动相：A：0.1%甲酸/水，B：0.1%甲酸/乙腈；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL；离子源：电喷雾（ESI），正离子模式；扫描方式：多反应监测（MRM）；脱溶剂气、锥孔气、碰撞器均为高纯氮气或其他合适的高纯气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最优灵敏度。
液相色谱质谱联用仪测定：按照液相色谱质谱联用仪测定样品和混合标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。在上述色谱条件下克仑特罗的参考保留时间为15.66min。空白试验除了不加试样外，均按上述测定步骤进行。这种测定方法属于（ ）。
猪肉中克仑特罗含量的测定
猪肉中有机磷农药含量的测定
猪肉中四环素类药物残留含量的测定
参考答案：
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